ה ההבדל העיקרי בין מושבה להכלאה של רובד היא ש הכלאה של המושבה היא השיטה המשמשת לבחירת מושבות חיידקים עם הגנים הרצויים ואילו הכלאת הפלאק היא שיטת הבחירה של הפאגים עם הגנים הרצויים. יתר על כן, ניתן להשתמש בהכלאה במושבה בהקרנה של ספריות מבוססות פלסמיד או קוסמיד ואילו ניתן להשתמש בהכלאת רובד בהקרנה של ספריות הפאגים.

מושבה והכלאה של רובד הן שתי טכניקות המשמשות בהקרנה של ספריות גנומיות או cDNA. הם נקראים גם מעלית המושבה ו הרמת לוחית בהתאמה.

מושבה, הכלאה של מושבה, הקרנת ספרייה, רובד, הכלאה של רובדים

מהי הכלאה של המושבה

הכלאה של המושבה היא שיטת סינון המשמשת לבחירת מושבות חיידקים עם רצף DNA רצוי. זה נקרא גם הכלאה כתם המושבה, הרמת מושבה אוֹ ציפוי העתק. הוא מאפשר הקרנה של מושבות מצופות בצפיפות גבוהה. הנוהל המקורי של הכלאה במושבה פותח לראשונה על ידי גרונשטיין והוגנס. ראשית, ניתן להפוך את מושבות החיידקים לקרום ולמושבות החיידקים מסולקים, וחושפים את חומצות הגרעין. לאחר מכן, חומצות הגרעין החשופות מקובעות על הממברנה על ידי פירוקן ומוכלאות עם הגששים הרדיואקטיביים.

איור 1: שיטת הכלאה של המושבה

מושבה היא מקבץ של חיידקים המתפתחים מתא חיידקי יחיד דרך הרבייה הלא -מינית. מכאן שלכל תאי החיידקים במושבה מסוימת יש אותו מבנה גנטי כמו גם החומר הגנטי שהפך. באופן כללי, חיידקים עוברים טרנספורמציה בעזרת וקטורים של פלסמיד או קוסמיד.

מהי הכלאה של רובד

הכלאה של רובד היא שיטת ההקרנה לפאגים רקומביננטיים. זהו שינוי של הכלאה של המושבות על ידי בנטון ודוויס בשנת 1977. השיטה נקראת גם הרמת לוחית. הליך הכלאה של רובד דומה להליך הכלאה של המושבה והלוחות מורמים על ידי יצירת קשר עם קרום ניטרוצלולוזה. חומצות גרעין נחשפות לאחר מכן ומקובעות על הממברנה, תוך הכלאה עם בדיקות רצויות.

איור 2: לוחות על צלחת אגר

רובד הוא אזור ברור על צלחת אגר המיוצרת על ידי בקטריופג מסוים על ידי פירוק תאים חיידקיים על אזור זה. בשל כמות הדנ"א המועטה המועברת לקרום ניטרוצלולוזה, הכלאה של רובד מייצרת פחות אותות רקע.

קווי דמיון בין מושבה והכלאה של רובדים

ההבדל בין מושבה והכלאה של רובד

הַגדָרָה

הכלאה של המושבה מתייחסת לשיטה לבחירת מושבות חיידקים עם גנים רצויים ואילו הכלאה של רובד מתייחסת לשיטת סקר המשמשת לזיהוי פאגים רקומביננטיים.

פותח על ידי

הכלאת המושבה פותחה לראשונה על ידי גרונשטיין והוגנס ואילו הכלאת הפלאק פותחה לראשונה על ידי בנטון ודויס בשנת 1977.

סוגי ספריות

הכלאה של המושבה כוללת זיהוי של ספריות המבוססות על פלסמיד או קוסמיד ואילו הכלאה של רובד כוללת זיהוי של ספריות הפאגים.

מספר מעליות

ניתן להרים מושבות פעם אחת בעוד שניתן להרים לוחות מספר פעמים.

אותות רקע

סיכום

הכלאה של המושבה היא שיטת סינון של מושבות חיידקים בספריות המיוצרות בעזרת וקטורים פלסמידיים או קוסמידיים. מצד שני, הכלאה של רובד היא שיטת סינון של בקטריופאגים בספריות הפאגים. ההבדל העיקרי בין מושבה להכלאה של רובד הוא סוג הספריות המוקרנות בכל שיטה.

התייחסות:

1. קקסון, אנה. "גישות מולקולריות לניתוח קהילה מיקרוביאלית." שטיפה - BioMineWiki, 20 באפריל 2006, זמין כאן 2. דייל, J W, ו- P J Greenaway. "זיהוי הפאגים הרקומביננטיים על ידי הכלאה של רובד." שיטות בביולוגיה מולקולרית (קליפטון, ניו ג'רזי)., הספרייה הלאומית לרפואה בארה"ב, זמינה כאן

באדיבות התמונה:

1. "הכלאה כתם" מאת Kaksonen - http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (תחום ציבורי) באמצעות ויקימדיה Commons 2. "M. לוח smegmatis ”מאת Wazzzup7up - יצירה משלו (תחום ציבורי) באמצעות ויקימדיה של Commons